نوع مقاله : مقاله پژوهشی
نویسندگان
1 گروه میکروبیولوژی دانشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه شهید بهشتی
2 دانشیار،گروه میکروبیولوژی دانشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه شهید بهشتی
3 استاد گروه بیوتکنولوژی دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی
4 استاد گروه میکروب شناسی دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران
چکیده
از آنجا که تعداد زیادی از جمعیت جهان به صورت نهفته با باسیل سل (Mycobacterium tuberculosis) آلوده هستند، واکسن هایی که سل نهفته را مورد هدف قرار بدهند تاثیر قابل توجهی در کنترل شیوع جهانی سل خواهند داشت. در این پژوهش ابتدا آنالیزهای بیوانفورماتیک روی یک پروتئین مایکوباکتریایی مربوط به فاز نهفته عفونت به نام Rv1733c انجام شد و پیش بینی شد که Rv1733c یک پروتئین غشایی با تعداد زیادی اپیتوپ های سلول B و T است که آن را کاندیدی مناسبی برای تولید واکسن می سازد. سپس، ژن rv1733c از H37Rv M. tuberculosis به صورت شیمیایی سنتز شد، در پلاسمید pTG19-T قرار داده شد و پلاسمید نوترکیب حاصل به E. coli Top10 ترنسفورم شد. پس از تایید توسط برش آنزیمی و توالی یابی، قطعه DNA مورد نظر به پلاسمید pET23a(+) منتقل و در (E. coli BL21 (DE3 بیان شد. پروتئین بیان شده بصورت باندی با وزن ملکولی تقریبی kDa 24 در ژل SDS-PAGE مشاهده شدکه توسط آنتی بادی علیه دنباله هیستیدینی آن، باندی با اندازه مشابه در آنالیز وسترن بلات آشکار شد. در نهایت خالص سازی پروتئین با استفاده از یک کیت کروماتوگرافی تمایلی برای دنباله هیستیدینی صورت پذیرفت.
کلیدواژه‌ها
عنوان مقاله [English]
Bioinformatics analysis of Rv1733c protein from Mycobacterium tuberculosis as a vaccine candidate, cloning and expression in Escherichia coli
نویسندگان [English]
- Mitra Ashayeripanah 1
- fereshteh eftekhar 2
- Bahram Kazemi 3
- Mohammad Mehdi Feizabadi 4
1 Department of Microbiology, Faculty of Biological Sciences and Technology, Shahid Beheshti University
2 Associate Professor Department of Microbiology, Faculty of Biological Sciences and Technology, Shahid Beheshti University
3 Professor Department of Biotechnology, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences
4 Professor Department of Microbiology, Faculty of Medicine, Tehran University of Medical Sciences
چکیده [English]
Due to the large population latently infected with Mycobacterium tuberculosis worldwide, vaccines against latent tuberculosis can make a dramatic impact on the global tuberculosis problem. In this study, bioinformatics analysis of a latency antigen from M. tuberculosis, Rv1733c, predicted that Rv1733c is an integral-membrane protein with a large number of B-cell and T-cell epitopes, making it a potential vaccine candidate. Therefore, rv1733c gene from M. tuberculosis strain H37Rv was chemically synthesized, inserted into pTG19-T plasmid and the recombinant plasmid was transformed into E. coli Top10. After confirming the presence of the DNA fragment by digestion with restriction endonucleases and sequencing, it was subcloned into pET-23a (+) and expressed in E. coli strain BL21 (DE3). The recombinant protein was observed as a band of ~ 24 kDa on SDS-PAGE gel and western blot analysis using an antibody against the hexa-histidine-tag of the protein revealed a band with the same size. Finally, the protein was successfully purified using a histidine-tag purification kit.
کلیدواژه‌ها [English]
- Rv1733c
- Mycobacterium tuberculosis
- Escherichia coli
- Cloning and Expression
- Protein purification
)